Evaluación de ensayos ultramicroanalíticos para la detección de anticuerpos contra el SARS-CoV-2 / Evaluation of ultramicroanalytic assays to detect antibodies against SARS-CoV-2

Introducción: En el presente trabajo se muestran los resultados de la validación de los ensayos serológicos in vitro para la detección de anticuerpos IgM, IgG y anticuerpos totales contra el SARS-CoV-2 UMELISA SARS-CoV-2 IgM, UMELISA ANTI-SARS-CoV-2 y UMELISA SARS-CoV-2 IgG desarrollados por el Centro de Inmunoensayo (CIE). Métodos: Se utilizaron paneles de muestras de suero de individuos negativos y de casos confirmados de COVID-19 para determinar el desempeño analítico de cada ensayo. Resultados: La especificidad clínica de los ensayos UMELISA SARS-CoV-2 IgM, UMELISA ANTI-SARS-CoV-2 y UMELISA SARS-CoV-2 IgG fue del 100 por ciento en todos los ensayos y la especificidad analítica fue de 100 por ciento para los dos primeros ensayos y del 93,1 por cientopara el último. La sensibilidad clínica fue de 64,3, 80,8 y 97,5 por ciento, respectivamente. El valor predictivo positivo fue de 100 por ciento en todos los ensayos, en tanto que el negativo osciló entre 83,3 y 95,2 por ciento. La concordancia fluctuó entre 92,4 y 96,9 por ciento y el índice kappa de todos los ensayos fue muy bueno. La sensibilidad de los ensayos se incrementó a 82,76, 96,5 y 100 por ciento, respectivamente, en las muestras de suero colectadas con más de 14 días de iniciado el cuadro clínico. Conclusiones: Los ensayos demostraron una elevada sensibilidad y especificidad, lo que permite contar con herramientas basadas en una tecnología desarrollada en Cuba que posibilita la realización de estudios serológicos, vigilancia epidemiológica y de otro tipo, incluyendo los relacionados con vacunas en una plataforma con amplia distribución nacional(AU)

Introduction: This paper shows the results obtained in the validation of in vitro serological assays to detect IgM, IgG antibodies, and total antibodies against SARS-CoV-2 UMELISA SARS-CoV-2 IgM, UMELISA ANTI-SARS-CoV-2 and UMELISA SARS-CoV-2 IgG developed by the Immunoassay Center. Methods: Panels of serum samples from negative and COVID-19 confirmed patients were used to determine the analytical performance of each assay. Results: UMELISA SARS-CoV-2 IgM, UMELISA ANTI-SARS-CoV-2 and UMELISA SARS-CoV-2 IgG assays demonstrated 100 percent clinical specificity for all assays; and 100 percent analytical specificity for the first two assays, and 93.1 percent for the last one. Clinical sensitivity was 64.3 percent, 80.8 percent and 97.5 percent, respectively. The positive predictive value was 100 percent in all assays, while the negative predictive value ranged from 83.3 percent to 95.2 percent. Concordance varied from 92.4 percent to 96.9 percent, and kappa index in every assay was very good. Assays sensitivity increased to 82.7 percent, 96.5 percent and 100 percent, respectively for serum samples collected more than 14 days after onset of the symptoms. Conclusions: The assays demonstrated high sensitivity and specificity, which allows us to have Cuban technology-based tools for serological, epidemiological surveillance, and other types of studies, including those related to vaccines on a platform with wide national distribution(AU)

Aplicación de la secuenciación nucleotídica de VP1 a la identificación de Enterovirus humanos

Se describió la introducción de un método molecular para la identificación de los Enterovirus basado en la amplificación, secuenciación y análisis filogenético de la proteína VP1. Se demostró que este método reduce grandemente el tiempo requerido para la identificación de los Enterovirus aislados y resulta de gran utilidad en la caracterización de aislamientos difíciles de tipificar, con el empleo de los reactivos inmunológicos de rutina. Por la rapidez de ejecución de la técnica reviste vital importancia su uso durante epidemias, dada la rápida determinación del agente causal.

The introduction of a mollecular method to identify the Entoviruses based on the amplification, sequencing and phylogenetic analysis of protein VP1 was described. It was proved that this method reduces significantly the time required for the identification of the isolated Entoviruses and that it is very useful in the characterization of isolates which are difficult to typify by the routine immunoloigical reagents. As it is a very fast technqiue, its use is very important during epidemics to determine the causal agent rapidly.

Antigenic and Genetic Characterization of Twenty-six Strains of Human Respiratory Syncytial Virus (Subgroup A) Isolated During Three Consecutive Outbreaks in Havana City, Cuba

Twenty-six human respiratory syncytial virus strains (subgroup A) isolated from three outbreaks in Havana City during the period 1994/95, 1995/96 and 1996/97 were analyzed to determine their antigenic and genetic relationships. Analyses were performed by monoclonal antibodies and restriction mapping (N gene) following amplification of the select region of the virus genome by polymerase chain reaction. All isolated strains were classified as subgroup A by monoclonal antibodies and they showed a restriction pattern NP4 that belonged to subgroup A. Thus the results obtained in this work, showed a close relation (100 percent) between antigenic and genetic characterization of the isolated strains in our laboratory. These methods permit the examination of large numbers of isolates by molecular techniques, simplifying the researchs into the molecular epidemiology of the virus

Incidencia de los Adenovirus en las conjuntivitisvirales / Incidence of Adenovirus on viral conjunctivitis

Se llevó a cabo un estudio de incidencia de los Adenovirus en las conjuntivitis virales, para lo cual se realizó un diseño muestraly se tomaron muestras de exudado conjuntival a 150 pacientes con diagnóstico deconjuntivitis de presuntiva causa viral, en el Hospital Oftalmológico "Ramón Pando Ferrer" en el período comprendido entre julio y diciembre de 1994. Las muestras fueron inoculadas en cultivo celular y a las que presentaron un efecto citopatogénico sugestivo de infección por Adenovirus, se les realizó la técnica de inmunofluorescencia indirecta (IFI). Se usaron anticuerpos monoclonales contra Adenovirus, lo que permitió identificarlas como pertenecientes a la familia Adenoviridae. Se utilizó la técnica de hemaglutinación, con hematíes de monos y ratas como sistema indicador, para agrupar los aislamientos previamente identificados mediante la técnica de IFI, después se les realizó el análisis por enzimas de restricción del genoma viral, lo cual posibilitó la clasificación en tipos. Los resultados de este estudio mostraron una incidencia de los Adenovirus en las conjuntivitis virales de 20 por ciento con un intervalo de confianza del 14-26 por ciento y un índice de confiabilidad de 95 por ciento. Se demostró que el serotipo 37 fue el que produjo conjuntivitis con mayor frecuencia(AU)##o

Aplicacion de la técnica de reacción en cadenade la polimerasa para la detección de secuencias de Papillomavirus humano / Aplication of polymerase chain reaction to detect sequences of human Papillomavirus

Se aplicó la técnica dereacción en cadena de la polimerasa para la detección de secuencias de papillomavirus humano (PVH) mediante controles de líneas celulares de cáncer cervical y tejidos obtenidos por biopsia con diagnóstico clínico positivo a PVH. Se utilizóun juego de oligonucleótidos consenso, que son complementarios a una región altamente conservada dentro del marco de lectura abierta. El del genoma viral de los PVH que afectan la mucosa cervical. Con este juego de cebadores fue posible amplificar secuencias de ácido desoxirribonucleico (ADN) correspondientes a los PVH 6 y 11, considerados dentro del grupo de bajo riesgo y de los PVH 16, 18, 31 y33 comprendidos en el grupo de alto riesgo. El estudio de la sensibilidad de latécnica de amplificación arrojó como resultado un nivel de detección de 3,5 partículas virales por cada genoma diploide celular

Detection of cytomegalovirus in urine of HIV-infected patients by DNA-DNA hybridization comparison with virus isolation, immunofluorescence and immunoperoxidase

Immunofluorescence and immunoperoxidase test directed against early viral antigens, and DNA-DNA hybridization were compared with viral isolation for their abilities to detect Cytomegalovirus (CVM) in the urine of 89 HIV infected patients. From the 100 urine samples collected, 70 were found positive by at least one method. Considering viral isolation as the "gold standard" technique, immunofluorescence and immunoperoxidase had a sensitivity of 92.3% and88% respectively, with a specificity in both cases of 95%. DNA-DNA hybridization showed a sensitivity of 90% but with lower (60%) specificity. All of the three assays were effective in detecting CVM from urine and the technical advantage of each is discussed.

ELISA para la detección de anticuerpos a virus de herpes simple / ELISA tests for detecting herpes simplex virus antibodies

Se presentan los resultados de la normalización de un ELISA indirecto para la detección de anticuerpos antivirus herpes simple y se establecen las condiciones y criterios de positividad de la prueba. Se aplicó en un total de 89 sueros obtenidos de pacientes inmunodeprimidos y de 76 sueros donantes de Banco de Sangre. Los resultados obtenidos fueron comparados con la técnica de inmunofluorescencia indirecta